肉的宰后嫩化重要的归因于肌原合成钎维组成的破碎，肌原合成钎维组成是由内源性核蛋清淀粉电离酶生物可降解肌原合成钎维和内部骨架核蛋清会造成的。与更多的年来很久是注重话题的钙核蛋清酶不一，胱天核蛋清酶（caspases）较近作为感熟悉语录题。胱天核蛋清酶在内部凋亡的强制执行阶段性起着首要的的效应，这其中caspase-3在死了核蛋清淀粉电离中的效应是双几个方面和繁琐的，那么最该进步研发。S-亚硝基化能够调低钙移除、电量排泄、核蛋清质生物可降解和内部凋亡来调低肉嫩，以及嫩度和持水的能力。一开始研发感觉S-亚硝基化都可以降低信任线粒体的caspase-3级联不起作用，这概率是腿部肌肉内部凋亡和羊肉高品质变化无常的因素。caspase-3的研发关键性是其与内部凋亡的内在联系，那么，越来越少有研发浅论S-亚硝基化调低caspase-3的逻辑。

2024年9月由长沙农耕高校张万刚专家教授团体在期刊Journal of Agricultural and Food Chemistry发表题为“Exploring the Effects of S‑Nitrosylation on Caspase‑3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro”文章，研究发现了GSNO处理后caspase-3的活性显著降低（P < 0.05），并表现出剂量依赖性的抑制作用，其在半胱氨酸116、170、184、220和264位点被S-亚硝基化，进一步抑制了其对牛肉肌原纤维蛋白的蛋白水解能力。拜谱生物技术为该研究提供了亚硝基化体现组学拜谱生物，助力发现目的蛋白上的亚硝基化修饰位点。

中文版大标题：体外研究S-亚硝基化对牛肉Caspase-3修饰和肌原纤维降解的影响

杂志：Journal of Agricultural and Food Chemistry

202历经四年不良影响成分：5.7

展现时间间隔：2024年9月

用户公司的：南京农业大学

实验素材：蛋白

拜谱保证水平：亚硝基化修饰组学

的技术路径：

一、深入分析报告

01.Caspase-3活力性

现有尚不模糊NO对caspase-3的减缓使用是否需要归因于NO介导的S-亚硝基化，各种氨水浓度梯度方向的GSNO作为一个外源性NO产生，以介导caspase-3的身体外S-亚硝基化。毕竟反映，与无GSNO的组相比之下，100、200和400μM GSNO组的caspase-3吸附性酶不错减少（图1），与已经媒体报道共同。GSNO解决减少caspase-3吸附性酶的未知原由仍迫切需要相一致。

图1 多种有机废气浓度的GSNO治理 对caspase-3生物的影响力

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

02.Caspase-3的S-亚硝基化层面

论述分析Caspase-3的亚硝基化水平，以指出GSNO对Caspase-3的体现性。经GSNO解决后，检侧到caspase-3蛋清S-亚硝基化承载力上升（图2）。这类但是呈现，外源性GSNO培植可顺利引发caspase-3的身体S-亚硝基化。从未有过惊艳的是，在不GSNO长期存在的比组中检侧到某个忽闪的S-亚硝基化带，这呈现caspase-3可以遭受内源性的S-亚硝基化。除此之外，本论述分析中caspase-3的S-亚硝基化水平较高，而caspase-3的抗逆性有效降低，这与以前的论述分析相同。但是，caspase-3的特异形S-亚硝基化淡化位点尚不清理，还要进每一步的打磨。

图2 GSNO加工对caspase-3S-亚硝基化水准的关系

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

03.Caspase-3的S-亚硝基化位点

通过亚硝基化修饰语组学检测caspase-3的S-亚硝基化位点。结果表明，caspase-3上的4个多肽中有5个半胱氨酸残基被蛋白S-亚硝基化修饰（图3）。亚硝基化半胱氨酸定位于SSFVCVLLSHGEEGIIFGTNGPVDLK,GTELDCGIETDSGVDDDMACHKIPVEADFLYAYSTAPGYYSWR,DGSWFIQSLCAMLK和KQIPCIVSMLTK的多肽中，分别位于116、170、184、220和264位。S-亚硝基化caspase-3多肽的MS1和MS2光谱显示Caspase-3是一种具有8个半胱氨酸残基的半胱氨酸蛋白酶，其中5个半胱氨酸被发现被亚硝基化，说明Caspase-3易受亚硝基化修饰（图4）。此外，据先前报道casase-3的催化残留亚硝基化Cys163，这不同于本研究的结果。S-亚硝基化caspase-3的丰度、位点的修饰水平和检测方法的灵敏度的差异可能是导致结果不一致的原因之一。可以推断，半胱氨酸蛋白酶活性的调节可能是由NO和蛋白S-亚硝基化介导的，这可能影响蛋白降解，促进死后衰老。

图 3 caspase-3的回文队列。蓝标注的回文队列表达S-亚硝基化肽，红白色标注的C表达S-亚硝基化半胱氨酸

(图源：Hou, Qin et al., JAgric Food Chem.. 2024)

图4. s-亚硝基化肽和caspase-3位点的MS1和MS2光谱图

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

04.S-亚硝基化Caspase-3溶解结蛋清

结血清算作一款更必要的癌组织骨架血清，在能维持肌癌组织设备构造的设备构造详细篇性和缩水性地方起着更必要影响，研究分析S-亚硝基化caspase-3对结血清生物光降解的灵敏性含有更必要必要性。与Std（未用胱天血清酶-3和GSNO孵育的一开始肌黏胶玻璃纤维血清）组好于，0 μM GSNO组（肌原黏胶玻璃纤维和caspase-3的孵育，无GSNO）的详细篇结血清的水分含碳量强势较低，显示信息caspase-3对结血清含有隐藏的的血清油脂水解技能。在GSNO孵育后，详细篇结血清的的水分含碳量严重加入（P < 0.05）。不仅而且，当GSNO含碳量偏高时，详细篇结血清的的水分含碳量继续上涨（P < 0.05）（图5）。一项发展揭示，SNO突显的caspase-3以平行依赖症的方试控制结血清的生物光降解。

图5.S-亚硝基化caspase-3溶解结蛋清

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

05.S-亚硝基化Caspase- 3吸附肌钙蛋白质-T

肌钙淀粉酶-T (TnT)是原肌球淀粉酶上下调整提供腹肌缩紧的细条的有必须肌原人造纤维材料板淀粉酶。TnT的化学挥发表现是监测到28和30 kDa的TnT。在亚硝基化前提下，caspase-3对TnT的化学挥发情況下图6已知，与Std组（会含caspase-3和GSNO的肌原人造纤维材料板）优于，caspase-3组中30 kDa TnT细节描写有分明曾加，说明caspase-3参于了TnT的化学挥发，除此以外，caspase-3与GSNO的孵育会导至30 kDa TnT减退。在100和200 μM GSNO组彼此不存在监测到分明的不同(P > 0.05)，而当GSNO的浓硫酸浓度高于400 μM 时，该细节描写有分明才能减少(P < 0.05)。那些会发现说明了SNO突显的caspase-3对TnT化学挥发的阻止帮助。结淀粉酶和TnT是caspase-3的过敏底物，而GSNO操作大幅度缩减caspase-3的生物能够会导至肌原人造纤维材料板淀粉酶化学挥发水平大幅度缩减。笔者认为说明，NO帮助的S-亚硝基化能够在突显半胱氨酸残基来上下调整caspase-3的生物，以求进步应响其对结淀粉酶和TnT的淀粉酶蛋白质水解专业能力，进而应响羊肉高品质。

图6. S-亚硝基化caspase- 3吸附肌钙核蛋白-T

(图源：Hou, Qin et al., J Agric Food Chem.. 2024)

二、个人心得体会

本实验致力于初探S-亚硝基化对caspase-3体现的关系到举例说明然后对羊肉肌原棉化学纤维身体之外化学降解的关系到。蛋清S-亚硝基化可以体现caspase-3的半胱氨酸残基，进而使得caspase-3几丁质酶降底，进的一步控制了其对羊肉肌原棉化学纤维蛋清的蛋清溶解程度。

三、拜谱工作小结

探索利用了酶活判断，亚硝基化装饰组学分享，WB等检查测量方式，出现 蛋清S-亚硝基化行装饰caspase-3的半胱氨酸残基，这引致了caspase-3吸附性的大大减少，相结三步控制了其对牛羊肉肌原弹性纤维蛋清的蛋清蛋白酶质水解程度。本探索为解释清楚蛋清质亚硝基化对色泽的自我调节共识机制具备没事个新的层面。

拜谱生物作为一家国内领先的多组学服务公司，可提供完善成熟的淀粉酶质组学、表达淀粉酶质组学、消化吸收组学、转录组学等多组学产品技术服务体系，整合多组学数据进行深入挖掘分析，全面解析机制机理等，助力高分文章发表。除此之外，拜谱生物还可提供半胱氨酸类型软件，包括亚硝基化、谷胱甘肽化、硫巯基化、次磺过酸、total阳极氧化恢复备份、游走巯基，欢迎大家咨询！

关联性文章：

Qin Hou, Chao Ma, Rui Liu, Zhuangli Kang, and Wangang Zhang.Exploring the Effects of S-Nitrosylation on Caspase-3 Modification and Myofibril Degradation of Beef In Vitro. Journal of Agricultural and Food Chemistry. doi.org/10.1021/acs.jafc.4c06663